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采血卡廠家詮釋從頭發樣本中提取DNA
采血卡廠家詮釋從頭發樣本中提取DNA是,使用微觀玻璃研磨和有機溶劑提取方案的改進版本從毛幹中分離DNA。由於這些方案使標本暴露於汙染風險增加,本研究使用二硫蘇糖醇(DTT)(Hi-media)以光滑的化學消化方法取代了繁瑣的物理消化方法,因為它是一種相對較強的還原劑。高鹽含量和陰離子洗滌劑。將消化緩衝液(500μl; 10mM Tris-HCl,10mM EDTA,50mM NaCl,20%SDS,pH7.5)與40μl1MDTT一起加入1.5ml微量離心管中(至終濃度)~80mM,240mM乙酸鈉,pH5.2)和15μl10mg/ ml蛋白酶K(至終濃度~0.3mg / ml; Himedia)。在渦旋之前將頭發樣品加入到該溶液中並在56℃下孵育2小時。孵育2小時後,再次渦旋樣品管,再加入40μl1MDTT和15μl10mg/ ml蛋白酶K,然後溫和混合並在60℃下再孵育2小時或直到頭發完全溶解。
然後用等體積的苯酚:氯仿:異戊醇溶液(25:24:1)從每個樣品中提取DNA,並通過將管倒置幾分鍾輕輕混合。將樣品以10,000g (4℃)離心(Eppendorf 5415R)10分鍾,然後將上層水層轉移到新鮮的滅菌微量離心管中。加入RNaseA(10μl,10mg / ml; Fermentas,Thermo Scientific)並保持在37℃溫育30分鍾。加入等體積的氯仿:異戊醇,再次在10,000g (4℃)下離心(Eppendorf 5415R)10分鍾。將上層水層轉移到新鮮的滅菌微量離心管中,然後加入兩倍體積的冷凍異丙醇和十分之一體積的3M乙酸鈉。將樣品在-20℃下冷卻1小時以進行DNA沉澱。將樣品在10,000g(4℃)下離心(Eppendorf 5415R)10分鍾。棄去上清液,加入250μl70%乙醇,輕輕敲打沉澱,然後以10,000rpm進一步離心(Eppendorf 5415R)10分鍾。棄去上清液,將沉澱物在層流氣流中風幹,重懸於50μl無核酸酶水或1×TE緩衝液中,並在-20℃或-80℃冷凍保存。
