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采血卡幹(gan)血(xue)斑(ban)法(fa)對(dui)不(bu)穩(wen)定(ding)樣(yang)品(pin)的(de)保(bao)存(cun)與(yu)一(yi)般(ban)的(de)樣(yang)品(pin)處(chu)理(li)法(fa)方(fang)相(xiang)比(bi)具(ju)有(you)一(yi)定(ding)優(you)勢(shi)。大(da)多(duo)數(shu)的(de)幹(gan)血(xue)斑(ban)樣(yang)品(pin)可(ke)以(yi)在(zai)室(shi)溫(wen)條(tiao)件(jian)下(xia)保(bao)存(cun),但(dan)是(shi)對(dui)於(yu)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)分(fen)析(xi)物(wu),低(di)溫(wen)可(ke)以(yi)延(yan)長(chang)保(bao)存(cun)時(shi)間(jian)。如(ru)酰(xian)基(ji)肉(rou)堿(jian)在(zai)幹(gan)血(xue)斑(ban)在儲存在室溫條件超過2周會出現因為水解作用而不穩定的情況,但是儲存在-18℃條件下可至少在330d內保持穩定。
如果不進行分析無德穩定性試驗(覆蓋樣品采集到分析過程),僅僅開展樣品的重複分析測定不能評價分析物的穩定性。一般而言,分析物在DNA采血卡幹血斑上的穩定性需要考察一種或幾種儲存條件(-60℃、-15℃、2~8℃、18~22℃)。
(1)比較不同儲存周期的QC樣品(低、中、高3個濃度,一式3份)的測量值與標示值的差異;
(2)比較真實樣品第一次測量值與經過不同儲存周期後的測量值。前者稱為QC樣品穩定性,後者稱為真實樣品穩定性。QC樣品穩定性的差異應不超過標示值的±15%。對於真實樣品的穩定性,每一種儲存條件至少選擇20個樣品進行重複分析,不選擇低於定量下限或者小於3倍定量下限濃度的樣品。重複測定的結果與兩次測定的平均值的比值應在80%-120%,並且至少283的樣品 符合上述標準。真實樣品穩定性的結果不僅闡明了目標化合物(包括氨基或酯化的化合物)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)情(qing)況(kuang),還(hai)揭(jie)示(shi)了(le)可(ke)能(neng)由(you)水(shui)解(jie)或(huo)降(jiang)解(jie)導(dao)致(zhi)的(de)轉(zhuan)化(hua)。任(ren)何(he)明(ming)顯(xian)的(de)濃(nong)度(du)下(xia)降(jiang)意(yi)味(wei)著(zhe)目(mu)標(biao)化(hua)合(he)物(wu)的(de)濃(nong)度(du)顯(xian)著(zhu)增(zeng)加(jia)可(ke)能(neng)由(you)代(dai)謝(xie)物(wu)轉(zhuan)化(hua)或(huo)者(zhe)共(gong)軛(e)分(fen)子(zi)水(shui)解(jie)引(yin)起(qi)。
另外,有必要將QC樣品放置在高溫條件下(30~40℃、40~50℃或50~70℃)或者凍融3次進行穩定性試驗,用來模擬樣品運輸過程的極端條件或者樣品儲存在低溫環境的情況下。上述 QC樣品的測定要隨行標準曲線和普通QC樣品,一至三份,並且偏差應在標示值和普通的±15%,這樣才能說明幹血斑樣品在高溫或者凍融條件下使穩定的。
有you些xie化hua合he物wu易yi發fa生sheng酶mei降jiang解jie,這zhe種zhong過guo程cheng可ke能neng發fa生sheng在zai幹gan燥zao階jie段duan或huo者zhe在zai點dian樣yang之zhi前qian,但dan酶mei抑yi製zhi劑ji又you不bu方fang便bian在zai點dian樣yang前qian添tian加jia,因yin此ci必bi須xu對dui沒mei有you經jing過guo任ren何he處chu理li的de分fen析xi物wu在zai全quan血xue中zhong2~3h的穩定性進行考察,已覆蓋血樣采集和幹燥過程。如果試驗結果顯示樣品不穩定,那麼該化合物不適合幹血斑點樣。